小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞（RAW264.7）是通過Abelson鼠白血病病毒誘導(dǎo)BALB/c小鼠產(chǎn)生腫瘤后得到的細(xì)胞株。其在醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用十分普遍，是許多白血病相關(guān)研究模型的常用細(xì)胞株，在微生物學(xué)、免疫學(xué)等研究中也十分常用。但RAW264.7細(xì)胞形態(tài)和分化狀態(tài)多變，在實(shí)際培養(yǎng)中較難把握，給科研工作帶來了一定困難；且RAW264.7細(xì)胞很難轉(zhuǎn)染，許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉(zhuǎn)不進(jìn)去，或者僅有不到10%的轉(zhuǎn)染效率。因此RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染方法就很值得去探討，本文就這些方面進(jìn)行介紹，以供科研工作者借鑒。

一、RAW264.7細(xì)胞的形態(tài)特征

       很多人養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞出現(xiàn)偽足；就連ATCC的描述也稱RAW264.7細(xì)胞形態(tài)多樣，可有圓形、類圓形，以及長出偽足的長梭形、多邊形，可單核可多核。而實(shí)際，有偽足的情況是RAW264.7細(xì)胞受到外界刺激進(jìn)行了分化，是細(xì)胞衰老、分化的表現(xiàn)；RAW264.7細(xì)胞的“最佳"形態(tài)應(yīng)是較小的單核圓形細(xì)胞。

二、RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)條件

       RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境與一般貼壁細(xì)胞并無差異。即培養(yǎng)箱溫度為37℃，CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養(yǎng)基為DMEM+10%的胎牛血清；實(shí)際上，經(jīng)研究者們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高糖型DMEM培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁更快、細(xì)胞生長速度更快。因此，推薦使用高糖型DMEM，F(xiàn)BS濃度為10%，作為RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基。

三、RAW264.7細(xì)胞的傳代

       關(guān)于RAW264.7細(xì)胞的傳代方法，ATCC推薦使用細(xì)胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細(xì)胞刮刀進(jìn)行傳代時(shí)，細(xì)胞能最大限度被收集起來，但會(huì)對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性損傷、影響細(xì)胞形態(tài)及貼壁時(shí)間等。采用胰酶消化時(shí)，由于RAW264.7細(xì)胞貼壁較牢，消化時(shí)間就較長。但消化時(shí)間點(diǎn)不易把握，易消化過度，對(duì)細(xì)胞生長造成抑制。

       因此，推薦使用彎嘴吸管吹打進(jìn)行傳代。具體做法是，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到傳代密度時(shí)，先棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS洗滌兩次，用彎嘴吸管吸取培養(yǎng)基，均勻、稍用力吹打瓶底，即可將細(xì)胞吹打下來（吹不下來的就不要了），離心后重懸即可分瓶培養(yǎng)。2 h后可見細(xì)胞貼壁。

由于RAW264.7細(xì)胞生長速度較快，一般1-2d換液1次，密度長至60%-70%左右即可傳代，傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久，細(xì)胞生長密度過大，細(xì)胞也容易發(fā)生分化，出現(xiàn)長偽足的多形細(xì)胞。

四、RAW264.7細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇

       RAW264.7細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇方法與一般貼壁細(xì)胞并無較大差別。但由于RAW264.7細(xì)胞對(duì)外界刺激較敏感，對(duì)營養(yǎng)條件要求較高，許多人建議降低DMSO的濃度，增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養(yǎng)基（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞的培養(yǎng)及其在誘導(dǎo)破骨細(xì)胞中的應(yīng)用，許丹等，中國骨質(zhì)疏松雜志，2016, 10, 22, 10）。

五、RAW264.7細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

（一）以往轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)

      RAW264.7細(xì)胞是一種巨噬細(xì)胞，有很強(qiáng)的貼壁性和偽足產(chǎn)生性，其轉(zhuǎn)染較難，一般采用電轉(zhuǎn)或慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)的方法。有研究者對(duì)RAW264.7細(xì)胞用幾種不同的轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行處理，對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（Lipofectamine 2000, Invitrogen）效率很低，僅為12.17±1.53%，慢病毒轉(zhuǎn)染效率是最高，可達(dá)34.75 ± 5.30%，羅氏轉(zhuǎn)染（X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche）和電穿孔轉(zhuǎn)染效率分別為16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%（巨噬細(xì)胞RAW264.7不同轉(zhuǎn)染方法的比較，李亞等，生物技術(shù)，2014, 24, 2）。

（二）最新高效轉(zhuǎn)染試劑

       既然RAW264.7細(xì)胞這么難轉(zhuǎn)染，實(shí)驗(yàn)還得繼續(xù)，那怎么辦呢？

       目前ZETA LIFE新推出一款A(yù)dvanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑。其廣泛適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，可轉(zhuǎn)DNA、RNA，也可共轉(zhuǎn)染，還可進(jìn)行小動(dòng)物活體轉(zhuǎn)染。

這一款轉(zhuǎn)染試劑有以下幾個(gè)特點(diǎn)：

       1.適用細(xì)胞廣

       廣泛用于293T，9L，A172, A375, A549, COS7, CHO-K1, C6S, C2C12, NIH3T3, RG2, T98G, U87, U118, MDCK, MCF-7, HT1080, HEK, H4, RAW264.7等多種細(xì)胞系。

      2.細(xì)胞毒性低

      其最高細(xì)胞存活率可高達(dá)98%，平均細(xì)胞存活率可達(dá)80%。

       3.轉(zhuǎn)染效率高

       其最高轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)96%，平均轉(zhuǎn)染效率可達(dá)70%。

（三）Advanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒進(jìn)RAW264.7的實(shí)例（來自實(shí)驗(yàn)者的實(shí)際數(shù)據(jù)）

由上圖可明顯看出Advanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑對(duì)RAW264.7轉(zhuǎn)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上，且細(xì)胞存活率較高。

       相信Advanced系列高效DNA、RNA轉(zhuǎn)染試劑 將是您對(duì)的選擇，希望能為您的研究助力。

Zeta Life高效Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑系列：                     

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD600025  （Zeta Life原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）0.25ml/1590元

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD600050  （Zeta Life真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）0.5ml/2390元

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD600075  （Zeta Life可代謝轉(zhuǎn)染試劑）0.75ml/2890元

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD600150  （Zeta Life免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）1.5ml/4490元

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD600500  （Zeta Life懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）5ml/14580元

品牌：美國Zeta Life  貨號(hào)：AD601000  （Zeta LifeRAW264.7細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）10ml/27480元

深圳市安培生物科技有限公司推出各類進(jìn)口胎牛血清和高效細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，均經(jīng)過反復(fù)充分驗(yàn)證，培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果好且重復(fù)性佳。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司在線客服聯(lián)系尋求幫助，新客戶也可聯(lián)系在線客服申請?jiān)囉醚b。