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血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進行熱滅活嗎？
發(fā)布時間： 2021-08-18 點擊次數(shù)： 6605次
血清熱滅活
1. 為何會有熱滅活血清呢？ 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
2. 血清熱滅活是否必要？ 血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟；但許多先前認為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立：
●去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜，早已被100nm濾膜取代；且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴格的監(jiān)控，血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。●去除補體等對熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50％，而C3（補體中引起免疫反應(yīng)的主成分）在胎牛血清中則幾乎不能檢出，直接使用血清對大多數(shù)的細胞株沒有負面影響。實驗顯示，大多數(shù)的細胞不需要熱滅活血清，對于非必須的細胞來說血清滅活對于細胞生長只有微小甚至無任何作用，還可能造成生長速率降低，沉淀物還會顯著增多，不利于細胞觀察。因此，若非必須，不需要對血清進行滅活處理。
3. 血清熱滅活對細胞生長有幫助嗎？ 細胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細胞株的生長能力影響，發(fā)現(xiàn)11株細胞中，熱滅活對6 株細胞有負面影響（紅）、3株無影響（綠）、2株有微弱正面改善（黃）。
▲ 使用未滅活或滅活血清的細胞生長狀況
所以，在正常操作下，熱滅活通常對“細胞生長"沒有明顯的促進作用，反而會破壞血清內(nèi)生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，降低細胞增殖速度。
4. 血清熱滅活的缺點？ 若實驗員設(shè)錯水浴溫度或忘記按計時器，都會導(dǎo)致過高的加熱溫度（下圖）或過長的加熱時間（下圖），進而大大降低血清的功能，影響細胞生長的表現(xiàn)。
缺點1：
▲ 過高的加熱溫度降低大多細胞株生長速度（僅一株未受明顯影響）
缺點2：
▲ 過長的加熱時間降低大多細胞株生長速度（僅一株未受明顯影響）
滅活加熱過程會增加血清的沉淀狀況，而沉淀又常常被認為是微生物的污染，進而耗費大量時間及精力驗證是否污染，導(dǎo)致實驗一再拖延。
5. 若細胞一定要使用熱滅活血清怎么辦？ 將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對照（同體積水）使用溫度計測溫，以測得溫度為56℃時為計時起始點，加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。
在滅活過程中，除了需要嚴格監(jiān)測加熱溫度及認真計算時間，還有幾個小技巧可以注意噢！
滅活時，水浴槽水面與血清液面等高！
使用水浴槽時，大多數(shù)人為避免血清瓶浮起來，會減少水浴槽內(nèi)的水量，讓水面降低；數(shù)據(jù)顯示，降低水面也會使瓶內(nèi)加熱不均、拉長加熱時間，增加血清破壞程度；所以還是建議將水浴槽內(nèi)水量增加，讓水面與血清液面等高，讓血清最大面積的接觸水流，提高滅活效率！
▲ 對比圖
至于血清瓶漂浮的問題，套上燒瓶用鉛環(huán)（下圖）就解決啦！
▲ 固定
滅活后，使用冷水浴降溫！
滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻，僅靠空氣傳導(dǎo)散熱，冷卻效果差（下圖），使得實際降溫時間拉長，對血清的影響較大；反之，流動的冷水浴散熱速度較快，冷卻效果佳，縮短降溫時間的同時，也減少對血清的破壞。
▲ 對比圖
現(xiàn)代血清加工技術(shù)進步，熱滅活已成為非必要步驟。熱滅活對細胞生長沒有明顯促進作用，反而會破壞血清、增加沉淀狀況。除非文獻指出該細胞必須使用滅活血清，一般細胞培養(yǎng)可省略血清熱滅活步驟。
如果必須使用滅活血清，加熱時水浴槽水面高度盡量與血清液面等高；滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫，能大輻度減少對血清的破壞。直接選擇購買已滅活的血清產(chǎn)品，也是個好選擇噢！
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