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    從海膽和沙幣等無脊椎動物系統(tǒng)獲取配子的實驗方法

    發(fā)布時間： 2021-11-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 874次

    材料與儀器

    海膽和沙幣
    KCl 溶液 3-氨基-1 2 4-三唑
    巴斯德吸管 Nytex 濾器

    步驟

    一、海膽和沙幣體腔內(nèi)注射 0.5 mol/L 的 KCl

    1. 制備 0.5 mol/L 的 KCl 溶液。

    2. 用海水沖洗一下動物以去掉顆粒物質(zhì)。

    3. 用一個 23~26 號的針頭向動物的口緣空腔內(nèi)注射多達(dá) 500 μl 或 100 μl KCl。

    4. 用巴斯德吸管收集“干"（米青）子，并儲存于置于冰上的小塑料管中。‘

    5. 將雌性動物在一杯海水中翻過來收集卵子。

    6. 用 Nytex 濾器洗卵子，以去掉顆粒，并使卵子吸附到濾膜上。

    7. 通過將水吸走或小心倒掉，再加入潔凈的海水將卵子洗幾遍。

    二、海膽的電刺激

    1. 將海膽反口面向上放在紙巾上。

    2. 將兩個電極一邊一個放在接近生殖管的貝殼部位，配子就會從生殖孔中釋放出來。

    3. 如果需要，在生殖管周圍的幾個部位通以電流。

    4. 開始收集卵子和（米青）子，并受精。

    三、海膽和沙幣卵的受精

    1. 制備稀釋的（米青）子懸液。

    2. 向洗過的卵中加入（米青）子。

    四、受精膜的去除

    1. 獲取卵子。

    2. 將卵子重懸于含有 1mmol/L 3-氨基-1,2,4-三唑的海水中。

    3. 受精。

    4. 當(dāng)受精膜出現(xiàn)后，將卵子倒入直徑比卵子小幾微米的 Nytex 網(wǎng)中。


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