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單鏈 cDNA 的合成
發(fā)布時間: 2023-04-21 點擊次數(shù): 771次材料與儀器
步驟
一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
去除 RNA 酶的雙蒸水
10XRT-PCR 緩沖液(去除 RNA 酶的雙蒸水,100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)
2. 酶和酶緩沖液
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(100~200U/ul)
SUPERaseINRNA 酶抑制劑(20U/ul;Ambion)
3. 核酸和寡核苷酸
dNTP 混合物(10 mmol/L,包含所有四種 dNTP)
隨機引物(5umol/L)
總 RNA(達(dá)到 2.5ug)
4. 實驗器材
薄壁的 PCR 管
二、方法
1. 在冰上加 2ul50umol/L 的隨機引物到薄壁的 PCR 管中(一個反應(yīng)一管)。
2. 加入 2.5ug 的總 RNA。
3. 加入 4ul 的 10 mmol/LdNTP 混合物。
4. 添加去除 RNA 酶的雙蒸水(RNaSe-freeH20),使體積達(dá)到 16ul。
5.70°C 加熱 10min, 變性二級結(jié)構(gòu),然后立即放在冰上。
6. 加 2ul 的 10XRT-PCR 緩沖液。
7. 加1ul 的 20U/ulSUPERaselN。
8. 加1ul 的 100~200U/ulMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶。
9.42°C 溫浴 1h。
10.95°C 加熱10min, 滅活逆轉(zhuǎn)錄酶。11. 繼續(xù)擴增步驟或停止反應(yīng),-2°C 儲存。
深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。
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產(chǎn)品中心
Products
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血清系列
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染
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支原體清除
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細(xì)胞凍存
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實驗耗材
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分子試劑
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細(xì)胞增殖與凋亡
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Biozellen系列
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培養(yǎng)基
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ELISA試劑盒
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TOYOBO(東洋紡)
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ZYMO RESEARCH
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Greiner(格瑞納)
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IKA(艾卡)
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化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
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PROSPEC系列
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Epigentek系列
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微生物檢測
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細(xì)胞生物學(xué)
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解離試劑
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細(xì)胞類-實驗耗材
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原代細(xì)胞
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植物檢測系列試劑盒
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SERANA
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細(xì)胞系
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生化試劑盒
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環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
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類器官培養(yǎng)
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緩沖器和解決方案
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生物三凝膠基質(zhì)
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細(xì)胞因子分子
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生物樣本庫