簡(jiǎn)介：

  小鼠肝癌細(xì)胞H22（武漢普諾賽）又稱(chēng)Hepatoma-22或Hepatoma 22，其分離自Balb/c小鼠腹水，由大連醫(yī)科學(xué)院建立。H22細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈淋巴母細(xì)胞樣。H22細(xì)胞常用于小鼠肝癌組織造模，在評(píng)估抗腫瘤藥物的療效、探究腫瘤微環(huán)境對(duì)肝癌進(jìn)展的影響、揭示肝癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制等方面的研究中有著廣泛應(yīng)用。

主要耗材及儀器：

 15ml離心管、50ml離心管、凍存管、巴氏滴管、培養(yǎng)瓶、封口膜、CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)、顯微鏡、生物安全柜、RPIM-1640、胎牛血清（FBS）、青-鏈霉素（雙抗）、二甲基亞砜（DMSO）等等。

培養(yǎng)流程：

 1. 細(xì)胞復(fù)蘇

1)用酒精棉球擦拭生物安全柜臺(tái)面，準(zhǔn)備好所需耗材，紫外30min，與此同時(shí)打開(kāi)37℃恒溫水浴箱對(duì)所用試劑進(jìn)行溫浴，同時(shí)也為復(fù)蘇細(xì)胞做準(zhǔn)備；

2)按照RPIM-1640+10%FBS+1% P/S的比例配制（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基，吹打混勻后按10倍細(xì)胞的體積（嚴(yán)格來(lái)講是10倍細(xì)胞的體積，實(shí)際操作中適當(dāng)減少用量對(duì)細(xì)胞并無(wú)影響）分裝至15ml離心管中（最好依據(jù)所要復(fù)蘇細(xì)胞的量提前計(jì)算要配制的完培用量及所用離心管的數(shù)目）；

3)從液氮拿出H22細(xì)胞，在37℃恒溫水浴箱中快速晃動(dòng)使其溶解（“快溶"），并將其轉(zhuǎn)移至提前分裝有完培的離心管中，吹打混勻；

4)1200rpm，離心3min；

5)棄去廢液，重新加入新的完培，重懸細(xì)胞后將其加入培養(yǎng)瓶中（完培的用量視培養(yǎng)瓶大小而定，25cm²用量3-5ml；75cm²用量10-15ml）;

6)蓋上培養(yǎng)瓶蓋子，以劃“十字"的方式晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，以使細(xì)胞分布均勻，鏡下觀察細(xì)胞均勻分布，置于37℃，5%-10% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，完成細(xì)胞復(fù)蘇。

2. 細(xì)胞傳代

1)鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%以上時(shí)即可進(jìn)行傳代；

2)收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至15min離心管中，1200rpm，離心3min，棄去上清；

3)等待離心的過(guò)程中，取出T25培養(yǎng)瓶（此時(shí)培養(yǎng)瓶數(shù)應(yīng)為之前培養(yǎng)瓶數(shù)的兩倍哦），做好標(biāo)記，并分別加入4ml（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基；

4)離心結(jié)束后棄去上清，向細(xì)胞沉淀中加入2ml完培，輕輕吹打重懸細(xì)胞，混勻后各取1ml細(xì)胞懸液分別加入新培養(yǎng)瓶中，蓋上蓋子，混勻置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可完成H22細(xì)胞傳代。

3. 細(xì)胞凍存

1)從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)瓶，轉(zhuǎn)移細(xì)胞至15ml離心管中，1200rpm，離心3min；

2)等待離心的過(guò)程中，按照55% RPIM-1640+40% FBS+5% DMSO的比例配制凍存液；

3)離心結(jié)束后，棄去上清，向離心管中加入凍存液（凍存液用量視分裝的管數(shù)而定），重懸細(xì)胞，分裝于凍存管中，做好標(biāo)記并封口；

4)將凍存管放入程序降溫盒中（“慢凍"），置于-80℃冰箱中，第二天即可拿出細(xì)胞置于液氮罐中保存。

四、注意事項(xiàng)

1．一定要有無(wú)菌意識(shí)，以防細(xì)胞被污染，實(shí)驗(yàn)者雙手及所有物品在進(jìn)入生物安全柜和培養(yǎng)箱前均應(yīng)用75%乙醇進(jìn)行表面消毒；

2．復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，不可讓水浴鍋的水位沒(méi)過(guò)凍存管管口，凍存管中僅剩一小塊冰塊時(shí)即可從水浴鍋中拿出，用其余溫使其融化；

3．生物安全柜在使用前后要用75%乙醇擦拭消毒，并紫外30min；

4．重懸細(xì)胞時(shí)動(dòng)作一定要輕柔，以防對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性損傷；

5．操作過(guò)程中手部不要從培養(yǎng)瓶瓶口、離心管管口等部位經(jīng)過(guò)；

6．生物安全柜最好嚴(yán)格按照清潔區(qū)-半污染區(qū)-污染區(qū)進(jìn)行分區(qū)，以免造成污染。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴(lài)的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷(xiāo)售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷(xiāo)售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專(zhuān)業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶(hù)提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶(hù)提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。可以在第一時(shí)間為用戶(hù)提供比較先進(jìn)的專(zhuān)業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專(zhuān)業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶(hù)提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專(zhuān)業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷(xiāo)售隊(duì)伍以及專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶(hù)提供服務(wù)。