支原體是什么？如何判斷細(xì)胞是否被支原體感染？如果感染了，細(xì)胞應(yīng)該如何處理？

以上三個問題，大多數(shù)養(yǎng)細(xì)胞的同學(xué)都會遇到，我們今天就講一下支原體污染的問題。

支原體，是一種沒有細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，在獨立生活和細(xì)胞內(nèi)寄生之間存活的原核生物，其結(jié)構(gòu)和典型的細(xì)菌相近。

部分支原體可以致病，例如肺部支原體。由于支原體沒有細(xì)胞壁，許多常見的抗生素，如青霉素對其沒有殺傷力。

和常見的細(xì)菌污染不同，細(xì)胞被支原體污染后，采用常規(guī)顯微鏡無法直接在明場視野下看到支原體，后者也并不會直接破壞宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)，而是改變細(xì)胞的代謝。

所以，細(xì)胞往往表現(xiàn)出生長狀態(tài)變差，例如生長緩慢，不像細(xì)菌污染那樣大量死亡。因此，被支原體污染的細(xì)胞是很難察覺出異樣的。

那么，如何判斷細(xì)胞是否被支原體污染呢？

常用的方法有熒光染色、PCR、ELISA、免疫染色、放射自顯影以及微生物學(xué)分析。

對于大多數(shù)同學(xué)而言，最簡的辦法，應(yīng)該是采用熒光染色。具體來說，就是使用Hoechst 33258對細(xì)胞進行染色。

其原理是被染色后的細(xì)胞，在50X或100X目鏡下觀察，可以看到細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)上有明確的藍(lán)色熒光微粒或絲狀物，后者就是支原體的標(biāo)志特征。

動物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版 配圖

使用Hoechst 33258進行染色的實驗方法見下圖（參考資料：動物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版）。

如果實驗室有條件的同學(xué)，也可以直接購買商業(yè)化的檢測試劑盒，這樣會更加方便和高效。

我們之前講過，如果細(xì)胞被微生物污染，例如細(xì)菌，那么應(yīng)該直接把被污染的細(xì)胞清理掉，而不是嘗試挽救。

同理，當(dāng)細(xì)胞被確認(rèn)感染了支原體后，第一選擇的處理措施依然也是清理掉污染的細(xì)胞。

除非該細(xì)胞非常重要，或無法替代，此時我們可以嘗試去除支原體污染。以下，我們也為大家分享支原體清除的實驗操作建議。（參考資料：動物細(xì)胞培養(yǎng) 第7版）

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